蛋白快速染液（免脫色）科研應(yīng)用指南

——高效、靈敏的蛋白檢測(cè)解決方案

一、產(chǎn)品原理與核心優(yōu)勢(shì)

1.1 技術(shù)原理

熒光/比色雙模式檢測(cè)：

含特殊染料（如SYPRO Ruby或Coomasie衍生物），可逆性結(jié)合蛋白的 疏水區(qū)域

線(xiàn)性動(dòng)態(tài)范圍：0.5-50 ng/band（比傳統(tǒng)考馬斯亮藍(lán)靈敏10倍）

免脫色設(shè)計(jì)：

染色-洗滌一步完成（省去甲醇/乙酸脫色步驟）

兼容下游質(zhì)譜分析（無(wú)醛類(lèi)交聯(lián)劑）

1.2 關(guān)鍵性能對(duì)比

參數(shù)免脫色染液傳統(tǒng)考馬斯亮藍(lán)銀染

檢測(cè)時(shí)間15分鐘2小時(shí)+脫色過(guò)夜4小時(shí)

靈敏度0.5 ng10 ng0.1 ng

質(zhì)譜兼容性優(yōu)秀差中等

1.3 適用場(chǎng)景

推薦用途：

? SDS-PAGE/WB快速質(zhì)檢

? 低豐度蛋白可視化

? 高通量篩選實(shí)驗(yàn)

二、標(biāo)準(zhǔn)化操作流程

2.1 染色步驟

復(fù)制

1. 電泳后凝膠處理：  

   - 去除SDS：用超純水漂洗2×5分鐘  

2. 染色：  

   - 加入染液（覆蓋凝膠），室溫?fù)u床孵育10分鐘  

3. 洗滌：  

   - 換超純水搖洗5分鐘（去除背景）  

4. 成像：  

   - 藍(lán)光激發(fā)（SYPRO Ruby）或直接可見(jiàn)光觀察  

2.2 注意事項(xiàng)

凝膠厚度：建議≤1 mm（過(guò)厚凝膠需延長(zhǎng)染色5分鐘）

染色液回收：可重復(fù)使用3次（靈敏度下降≤20%）

三、數(shù)據(jù)解讀與優(yōu)化

3.1 結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)

陽(yáng)性信號(hào)：清晰條帶（無(wú)橫向拖尾）

背景控制：凝膠非蛋白區(qū)域接近無(wú)色

3.2 常見(jiàn)問(wèn)題排查

現(xiàn)象可能原因解決方案

條帶模糊SDS未去除延長(zhǎng)水洗至10分鐘

背景過(guò)高染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)縮短至5-7分鐘

信號(hào)弱蛋白量不足/染料失效增加上樣量/更換新染液

四、技術(shù)問(wèn)答（Q&A）

Q1：能否用于Native-PAGE？

需改用 非變性專(zhuān)用染液（如F90100NT），避免SDS干擾

Q2：染色后能否回收蛋白？

可切膠進(jìn)行 膠內(nèi)酶解（需用50mM NH?HCO?充分洗滌）

文檔優(yōu)化建議：

插入 【染色效果對(duì)比圖】（標(biāo)記不同靈敏度）

添加 染色時(shí)間計(jì)算器 二維碼（根據(jù)凝膠厚度調(diào)整）

關(guān)鍵步驟標(biāo)注 ??警示（如"避免金屬器皿接觸"）